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                                IPHASE/匯智和源 體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗熱點問題解答【上】

                                更新時間:2023-11-03      點擊次數:423

                                體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗常見問題與解答

                                —熱點問題—


                                第一題    細胞被“黑膠蟲"污染了該如何處理?

                                如果培養的細胞被“黑膠蟲"污染,需先去評估污染的嚴重程度。如果污染不嚴重,可選用市售的“黑膠蟲"清除試劑進行處理;如果污染較嚴重,建議直接丟棄該細胞,分析造成“黑膠蟲"污染的原因并進行治理。


                                第二題    CHL細胞為試驗系統,細胞準備時推薦的接種密度是多大?接種后培養多久可以開始染毒?

                                本公司使用T25瓶進行試驗,接種密度為6~9×10^4/mL,接種量為5mL,即每瓶細胞量是3×10^5個~4.5×10^5個。一般情況下,接種后24h左右細胞的融合率可達到80%即可進行染毒,如果融合率不夠,也可以繼續培養直至滿足試驗需求。


                                第三題    一般如何確定秋水仙素的濃度和處理時間???

                                秋水仙素劑量大,則作用時間短;秋水仙素劑量小,則適當延長作用時間。本公司使用的秋水仙素濃度是1μg/mL,4h。


                                第四題    秋水仙素工作的機理是什么?

                                秋水仙素可以抑制紡錘體的形成,導致紡錘絲無法捕捉到著絲粒而造成染色體不能向細胞兩極移動。同時,秋水仙素處理后,染色體將會不能排列在赤道板,所以在細胞中會散亂分布。


                                第五題    細胞收集量少是什么原因導致的?如何優化?

                                細胞收集量少的原因主要有以下幾點:

                                (1)酶消化過程消化不干凈;

                                (2)離心速度過低,細胞不能沉淀,導致細胞丟失;

                                (3)鋪板細胞量不夠;

                                (4)樣品對細胞有毒性,細胞死亡。


                                優化策略:

                                (1)酶消化過程需于顯微鏡下觀察,確保消化完;

                                (2)適宜的離心條件,通常250g,5min;

                                (3)細胞懸液需混合均勻,必要時多次計數;

                                (4)如有需求,請于正式試驗前開展預試驗。


                                第六題    低滲目的是什么?有什么注意事項?

                                在低滲環境中,細胞易吸水膨脹,染色體鋪展,以便能在一個平面上觀察所有染色體形態,為后續染色做準備。在低滲過程中我們需要注意以下幾點:


                                (1)低滲時間。低滲時間過長,可引起細胞破裂,染色體丟失;低滲時間不足,細胞膨脹度不夠,染色體聚集,分散不好,不利于閱片。本公司低滲是使用0.075mol/L的氯化甲溶液37℃水浴30~40min。

                                (2) 細胞操作需輕柔。低滲后的細胞會脹大,通透性增強,細胞操作過程一定要輕柔,以防細胞破裂。

                                (3)離心條件需適合。低滲后細胞膨脹,離心力過高,細胞容易破裂,導致染色體丟失;離心力過低,細胞不能沉淀,收集不到細胞。


                                第七題    細胞在固定過程中丟失是什么原因導致的?

                                細胞在固定過程中丟失可能是因為離心速度過低,細胞不能沉淀或沉淀不夠,在更換固定液的過程中導致細胞丟失。


                                第八題    每次固定的時間是多久?固定幾次比較合適?

                                本公司使用的是預固定加重復固定的方法。預固定在低滲結束前進行,一般3~5min,步驟雖簡單卻不能省略,可有效預防細胞因加入大量的固定液而凝結成塊。固定步驟共重復3次,一般30±5min。


                                第九題    玻片干燥怎么操作?

                                可于室溫下自然干燥,也可于37℃干燥箱中烘干。


                                第十題    使用吉姆薩染液同樣條件下染片,為什么會出現有的片子是藍色的,有的是紅色的?

                                根本原因是因為染色過程中pH的變化。吉姆薩染液由天青,伊紅組成,所帶電荷隨溶液PH而定。在偏酸性環境中下在電荷增多易與伊紅結合染色偏紅;在偏堿性環境中負電荷增多,易與美藍或天青結合,染色偏藍。


                                發    文    章    得     獎    勵


                                凡使用本公司產品,在國內及國際刊物上發表論文(論文發表日起一年內),并注明產品屬于匯智和源/IPHASE所有,即可申請獎勵。根據發表刊物影響因子不同,給予不同金額獎品:


                                非SCI論文及IF≤5分,500元禮品;


                                5分<IF≤8分 800元;


                                8分<IF≤10分 1000元;


                                IF≥10分 2000元;


                                注:禮品卡也可兌換同等金額產品購買抵用券;


                                活動多多,禮品豐厚,快來參與吧!


                                關    于    我    們


                                匯智和源,致力于為創新藥研發企業及生命科學研究機構提供高品質的生物試劑,IPHASE為公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research"。


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