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                                IPHASE/匯智和源 體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗熱點問題解答【下】

                                更新時間:2023-11-03      點擊次數:393

                                體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗常見問題與解答

                                —熱點問題—


                                第一題    一張玻片可觀察到200個中期分裂相嗎?如果不夠,該如何處理?

                                大多數情況下,一張玻片很難找到200個可用于分析的中期分裂相,建議同一個劑量組多制作一些玻片,本公司一個劑量組通常會制作至少4張玻片,以保證足夠中期分裂相細胞可供分析。


                                第二題    如何辨別細胞是否處于中期分裂相?

                                中期分裂相細胞染色體數目、形態比較固定,染色體包含兩條染色單體,具體見下圖:

                                圖片1.png


                                第三題    有絲分裂指數測定的意義是什么?

                                中期分裂相指數是指所觀察的細胞中中期分裂相細胞的占比,是一項反映細胞增殖程度的指標。


                                第四題    油鏡如何使用?是否要將油鏡鏡頭整個浸入油中?

                                油鏡的使用需要搭配香柏油,香柏油與玻璃的折光率相近,光線穿過載玻片進入香柏油發生折射較少,而進入油鏡的光較多,視野較為明亮。油鏡使用時,需要將油鏡鏡頭浸入香柏油中,并與玻片接觸,使用結束后使用少量二甲苯擦拭干凈鏡頭。


                                第五題    中期分裂相細胞少是什么原因導致?如何優化?

                                中期分裂相細胞少的原因如下:

                                (1)秋水仙素的劑量過小,作用時間過短;

                                (2)重懸時固定液量過大,細胞密度過低。


                                優化策略:

                                (1)秋水仙素劑量大,則作用時間短;

                                (2)秋水仙素劑量小,則適當延長作用時間,請選擇適宜的劑量和時間;

                                (3)根據細胞的收集量確定重懸體積;

                                (4)適當增加滴片的數量。


                                第六題    染色體聚集可能是由哪些原因導致?

                                染色體聚集的可能原因如下:


                                (1)秋水仙素用量過多,導致染色體的過度濃縮;

                                (2)低滲時間不足,導致染色體聚集在一起分散不開;

                                (3)細胞懸液未充分吹打均勻;

                                (4)載玻片未進行預冷,玻片表面張力不夠;

                                (5)滴片高度不夠。


                                第七題    染色體分散過度可能是由哪些原因導致?

                                染色體分散過度的根本原因就是細胞膜破裂。主要由以下可能:


                                (1)低滲時間過長;


                                (2)離心速度過高;


                                (3)細胞操作過程不注意,操作過度;


                                (4)滴片距離過高。


                                第八題    染色體畸變試驗閱片需要配套什么樣的顯微鏡?如何操作?

                                染色體畸變試驗使用中期分裂相阻斷劑(如秋水仙素或秋水仙胺)處理細胞,使細胞停止在中期分裂相,此時染色體形態、數目都比較固定,使用普通生物顯微鏡即可進行染色體結構畸變觀察。先于低倍鏡下尋找背景清晰、分散良好、染色體收縮適中的中期分裂相細胞,再于油鏡下進行染色體畸變觀察并記錄。


                                第九題    玻片想要長期保存,需要如何處理?

                                如果玻片要長期保存,必須要做好封片(可使用中性樹脂膠并加蓋玻片),并置于陰涼干燥處保存。


                                發    文    章    得     獎    勵


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                                關    于    我    們


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